人細(xì)胞ELISA試劑盒的檢測(cè)原理主要基于酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定技術(shù)。ELISA是一種廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷的免疫學(xué)檢測(cè)方法,用于定量或定性分析液體樣本中的抗原、抗體或蛋白質(zhì)。
1、包被:首先將針對(duì)目標(biāo)抗原的特異性捕獲抗體固定在微孔板的各個(gè)孔內(nèi)壁上,形成一層抗體膜。
2、封閉:為了避免非特異性結(jié)合,需要用封閉液填充未被捕獲抗體占據(jù)的位點(diǎn)。
3、加樣:將含有待測(cè)抗原的樣本加入到包被有捕獲抗體的孔中,抗原會(huì)與捕獲抗體特異性結(jié)合。
4、洗滌:去除未結(jié)合的物質(zhì),通常使用洗滌緩沖液多次清洗。
5、加入檢測(cè)抗體:加入針對(duì)同一抗原的另一表位的酶標(biāo)記檢測(cè)抗體,該抗體與抗原結(jié)合形成“夾心”復(fù)合物。
6、再次洗滌:去除未結(jié)合的檢測(cè)抗體。
7、顯色:加入酶的底物,酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體會(huì)催化底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng),生成可見(jiàn)的顏色產(chǎn)物。
8、終止反應(yīng):根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),可能需要加入終止液來(lái)停止顏色的發(fā)展。
9、讀數(shù):使用酶標(biāo)儀測(cè)量每個(gè)孔的光密度(OD值),該值與樣本中抗原的濃度成正比。
通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)比較,可以計(jì)算出樣本中抗原的濃度。ELISA試劑盒通常會(huì)提供一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,以建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
人細(xì)胞ELISA試劑盒的優(yōu)點(diǎn)包括靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作相對(duì)簡(jiǎn)單、可同時(shí)處理大量樣本等。然而,ELISA結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性受到多種因素的影響,包括抗體的質(zhì)量、樣本的處理和儲(chǔ)存條件、實(shí)驗(yàn)操作的標(biāo)準(zhǔn)化等。因此,在進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)時(shí),需要嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的要求操作,并采取適當(dāng)?shù)馁|(zhì)量控制措施。