1、將一個(gè)單克隆抗體與固體載體連接,形成固體單克隆抗體。清洗人抗體ELISA試劑盒以去除未結(jié)合的物質(zhì)。
2、同時(shí)加入待測(cè)樣品和酶標(biāo)單抗進(jìn)行孵育。待測(cè)抗原與固體McAb和酶標(biāo)記的McAb反應(yīng),形成雙抗體夾心復(fù)合物。清洗以去除松散物質(zhì)。
3、添加基材以顯色。
一些適用于雙抗體夾心法的ELISA試劑盒也可以通過(guò)雙位點(diǎn)一步法檢測(cè)。例如,HBsAg也可以通過(guò)這種方法檢測(cè)。原理是:將純化的抗-HBs吸附在固相載體表面,加入待測(cè)血清(或血漿),再加入另一種用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗-HB(酶綴合物)。如果血清或血漿中含有HBsAg,通過(guò)孵育形成固相McAb-HBsAg酶標(biāo)記的McAb復(fù)合物,加入底物,通過(guò)顯色反應(yīng)進(jìn)行測(cè)定。
1、吸液速度太快不容易避免氣泡,吸液量不夠準(zhǔn)確。
2、將所有液體加入酶標(biāo)簽孔后,將酶標(biāo)簽板放在桌子上,平行輕輕搖晃30秒,使液體充分混合并充分反應(yīng)。
3、在培養(yǎng)過(guò)程中,應(yīng)使用酶標(biāo)記板密封蓋板膜,以防止水分蒸發(fā),并防止曲線偏離線性。
4、由于底物顯色劑對(duì)光敏感,應(yīng)遠(yuǎn)離光儲(chǔ)存。
5、每次手動(dòng)洗板時(shí)加入洗滌液后。人抗體ELISA試劑盒應(yīng)靜置15~30秒。不要將一個(gè)酶標(biāo)記L中的洗滌液濺到另一個(gè)酶標(biāo)志孔中,以防止交叉污染。抖掉洗滌液,用毛巾或吸水紙輕拍酶標(biāo)簽板。